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折疊濾芯微濾膜酶活性的測定

時間：2018-10-12 11:31 點擊量：次

折疊濾芯微濾膜酶活性的測定
常常利用同位素示蹤法來測定參與生物高分子合成的酶活性，即利用標記小分了底物和酶保溫，然后把放射性的小發子(底物)和放射性大分子(產物)分開。這一般用酸或有機溶劑沉淀來完成(沉淀蛋白質一般用三氯醋酸，沉淀核酸常用過氯酸)。這里在，用微孔濾膜過濾可以簡便快速地把沉淀產物完全收集在濾膜上，然后充分洗滌除去未摻入的小分子放射性底物，最后干燥濾膜，直接溶于閃爍液中進行均相測定或懸浮在閃爍液中進行非均相測定。降解大分子的酶也可以用微孔濾膜技術來測定活性。例如測定DNA內切酶活性時，用酸沉淀法不夠滿意，因為產物中也包括較大分子的寡核苷酸，而它也和酸不溶性底物一起沉淀出來，為了精確測定核酸內切酶活性，酶反應混合物直接用Schleicher&Schuell廠生產的A型硝酸纖維素酯濾膜過濾，它只滯留大分子而不滯留寡核苷酸，能把產物和底物分離得比較徹底，結果是比較滿意的。
在原則上，凡是能把一種放射性前體轉移或摻入到一種能選擇性沉淀形式產物的酶中，都能用微孔濾膜技術測定活性。
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